СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ 4
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
2.1. Гиалуроновая кислота и её гидрофобизированные производные, свойства и применение в протиопухолевой терапии 9
2.2 Наночастицы парамагнетического оксида железа SPION 13
2.2.1 Общие свойства и применение SPION 13
2.2.2 Применение SPION в тераностике 18
2.3 Технология получения мицелл из гидрофобизированной гиалуроновой кислоты, загруженных наночастицами SPION. 20
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 25
3.1 Полимерные мицеллы на основе гидрофобизированной гиалуроновой кислоты, нагруженных лекарственными препаратами 25
3.1.1 Получение полимерных мицелл на основе гидрофобизированной гиалуроновой кислоты, нагруженных лекарственными препаратами. 25
3.1.2 Исследование стабильности мицелл ГК-С18:ETO в среде RPMI 28
3.1.3 Исследование мицеллярных форм ГК-С18:ETOи ГК-С18:ETO-Cbz на культурах клеток in vitro 29
3.2 Отработка технологических подходов для получения самособирающихся структур на основе гидрофобизированной гиалуроновой кислоты и наночастиц SPION 32
3.2.1 Получение самособирающихся структур на основе гидрофобизированной гиалуроновой кислоты и наночастиц SPION. 32
3.2.2 Изучение влияния скорости центрифугирования на размер полученных мицелл 35
3.2.3 Количественное определение железа в мицеллах ГКС18:SPION спектрофотометрическим методом 36
3.2.4. Изучение полученных мицеллярных структур ГК-С18:SPION методом просвечивающей электронной микроскопии 40
3.2.5 Изучение стабильности и нахождение ККМ мицелл ГК-С18:SPION 42
3.3 Получение и подшивка самособирающихся структур ГК-С18, модифицированной цистеином (ГК-С18-Cys) 43
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 48
4.1 Реактивы и оборудование 48
4.2 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных этопозидом (ETO) 49
4.3 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных 4’-О-бензилоксикарбонильным производным этопозида (ETO-Cbz) 49
4.4 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных паклитакселом (PTX) 49
4.5 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных паклитаксел+этопозид (PTX+ETO) 50
4.6 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных паклитаксел+4’-О-бензилоксикарбонильное производное этопозида (PTX+ETO-Cbz) 50
4.7 Спектрофотометрическое определение железа в мицеллах ГКС18_1:SPION 51
4.8 Получение мицелл ГК-С18, нагруженных наночастицами SPION 52
4.9 Определение размеров полученных мицеллярных форм методом динамического светорассеяния (ДСР) 53
4.10 Определение дзета-потенциала полученных мицеллярных форм методом микроэлектрофореза 53
4.11 Исследование стабильности при разбавлении 53
4.11.1. Исследование стабильности при разбавлении мицеллярных форм ГК-С18:SPION в водной среде 53
4.11.2 Исследование стабильности при разбавлении мицеллярных форм ГК-С18:ETO в клеточной среде RPMI 54
4.12 Исследование стабильности во времени 54
4.13 Исследование ККМ мицеллярных растворов ГК-С18 и ГК-С18:SPION методом ДСР 54
4.14 Исследование ККМ мицеллярных растворов ГК-С18:ETO методом ДСР 54
4.15 Изучение размеров мицелл ГК-С18:SPION методом просвечивающей электронной микроскопии 55
4.16 Подготовка культуры для проведения MTT-теста 55
4.17 Оценка цитотоксичности препаратов на культуре клеток MCF7 (МТТ-тест)… 56
4.18 Получение мицелл ГК-С18, конъюгированных с цистеином 56
4.19 Определение критической концентрации мицеллообразования ККМ….. 57
4.20 Подшивка полученных мицеллярных форм ГК-С18-Cys пероксидом водорода 57
4.21 Сравнение подшитых мицелл ГК-С18-Cys и ГК-С18, гомогенизируемых в течение одинакового времени 57
4.22 Исследование стабильностимицелл ГК-С18-Cys во времени 57
5. РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ 58